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两钟卵白质测定办法比拟

泉源:  种别:适用技能  更新工夫:2015-03-30  阅读

  两钟卵白质测定办法比拟

  动物构造总卵白质的提取办法较多,常用的办法有TCA-acetone(三氯醋酸-丙酮沉淀)法,Tris法、磷酸缓冲液(PB)法和试剂盒法等。别的,卵白质浓度的测定办法有紫外分光光度法(UV法)、Bradford法、定氮仪法、双缩脲(Biuret)法、BCA(Bicinchoninic Acid)法、Lowry法和试剂盒法等。此中如今最常用的还数卵白质测定仪,由于卵白质测定仪接纳凯氏定氮法,而凯氏定氮法是规范的测定卵白质含量的办法。上面我们就PB法和Tris法做一比拟。

  接纳PB法提取总卵白,本钱低,速率快,操纵复杂,提取量较高。但是,该法提取的总卵白质质量差,丧失了小分子量卵白;并且,杂质含量高,电泳时杂质向泳道两侧分散,挤压其他泳道,样品安排一段工夫后有分明的杂质沉淀。因而,该法提取的总卵白不宜用于电泳剖析。

  Tris法是比拟常用的办法,本钱低,速率快,操纵复杂,提取量高。固然接纳该法提取的卵白质组分是完全的,但小分子量卵白的量不如大分子量卵白的。颠末改良后,虽有所改进,但仍不睬想。不外,接纳改良Tris法提取总卵白,停止SDS-PAGE电泳剖析,结果精良。Tris碱虽可避免卵白的水解,但由于引入盐离子,会招致IEF(等电点聚焦)电压过低,从而影响聚焦。因而,用该法提取的总卵白不宜用于二维电泳(2-DE)剖析。